Mokslinis NMN kiekybinio nustatymo biologiniuose mėginiuose metodas
1. Įvadas
Papildymas nikotinamido mononukleotidas (NMN) siekiant padidinti nikotinamidadenindinukleotido (NAD+) kiekį, buvo nustatyta, kad tai yra perspektyvi anti-senėjimo intervencija. Tačiau vis dar yra rimtas iššūkis tiksliai kiekybiškai įvertinti NAD+ tarpines medžiagas, NMN ypač. Šiuo tyrimu siekiama įdiegti naują metodą, dvigubą izotopų tarpininkaujamą LC-MS/MS metodiką (dimeLC-MS/MS), skirtą tiksliam kiekybiniam NMN biologiniuose mėginiuose.
2. Veiksniai, turintys įtakos tiksliam NMN aptikimui
NMN sunku tiksliai nustatyti dėl jo pažeidžiamumo fermentiniam skilimui, konversijai apdorojant mėginius, sudėtingo elgesio skirtingose kolonėlėse ir ekstrahavimo sąlygose, taip pat dėl matricos efekto.
Konkrečiai, NMN pasižymi dideliu poliškumu ir mažu lakumu, kurį lengva ištirpinti vandenyje, bet sunku ištirpinti organiniuose tirpikliuose. Šios savybės labai riboja daugelio įprastų kiekybinės analizės metodų taikymą.
BIologiniai mėginiai pavyzdžiuikraujas atlieka reikšmingą CD38 ir CD73 (ekto-5) aktyvumą’-nukleotidazė), kurios abi gali naudoti NMN kaip substratą.
NMN elgesys stulpelyje yra labai sudėtingas, tikriausiai dėl to, kad jo krūviai yra dvišaliai, todėl subtilūs ekstrahavimo ir kolonėlės sąlygų skirtumai daro didelę įtaką patikimam ir tiksliam NMN aptikimui.
3. Įveikos strategijos dimeLC-MS/MSsumažinti poveikio veiksnių poveikį
Siekiant išvengti minėtų veiksnių trukdžių, taikomas NMN-2 prototipo stulpelis. Šioje kolonėlėje yra C18 pagrindu pagamintų didelio grynumo silicio dioksido dalelių, kurios yra labiau linkusios surišti hidrofilinius junginius nei anglies dalelės, pagerindamos atskyrimo gebėjimą.
Naudojama perchlorato rūgštis (PCA), nes ji gali efektyviai išskirti NAD+ ir NMN iš biologinių mėginių, tokių kaip plazma, su minimaliais nuostoliais.
Norint prisitaikyti prie matricos efektų, prieš ekstrahuojant PCA, į biologinius mėginius įpilamas fiksuotas kiekis (1 μM) kiekvieno izotopinio junginio.
4. PrivalumassdimeLC-MS/MS
Dvigubi izotopiniai NMN standartai, NMN (M + 14) ir NMN (M + 5), LC-MS/MS pagrįstoje metodikoje gali tiksliai atsekti NMN likimą mėginių apdorojimo metu, o tai žymiai padidina NMN matavimo tikslumą ir patikimumą biologiniuose mėginiuose. Be to, dimeLC-MS/MS gali įvertinti ekstrahavimo efektyvumą ir absoliučią NMN koncentraciją skirtingų tipų biologiniuose mėginiuose.
5. Išvada
ThYranaujas LC-MS/MS-pagrįsta metodika su dvigubais izotopiniais NMN standartais gali tiksliai ir patikimai išmatuoti NMN biologiniuose mėginiuose.Jis gali būti naudojamas būsimiems NMN vartojimo tyrimams.
6. Nuoroda
Unno, Junya et al. "Absoliutus nikotinamido mononukleotido kiekybinis nustatymas biologiniuose mėginiuose dvigubos izotopų sukeltos skysčių chromatografijos būdu - tandemine masių spektrometrija (dimeLC-MS/MS)." npj senėjimas vol. 10,1 2. 2024 m. sausio 2 d., doi:10.1038/s41514-023-00133-1
Kodėl verta rinktis BONTAC?
BONTAC yra pasaulio lyderis NMN industrija. Mes turime pirmąją viso fermento katalizės technologiją Kinijoje ir tapome pirmaujančia įmone koenzimo produktuose, kurie plačiai naudojami sveikatos pramonėje, medicinoje ir grožyje, žaliame žemės ūkyje, biomedicinoje ir kitose srityse. Pažymėtina, kad BONTAC yra NMN garsaus Davido Sinclairo komandos žaliavų tiekėjas Harvardo universitete. Mūsų paslaugos ir produktai yra patikimi. Be to BONTAC turi nepriklausomą koenzimo inžinerijos technologijų tyrimų centrą provincijos lygmeniu Kinijoje ir savarankiškai valdomas gamyklas, kuriose galima užtikrinti produktų grynumą ir stabilumą.
Atsakomybės apribojimas
ThYra straipsnis yraremiantis nuoroda įakademinis žurnalas. Atitinkama informacija yra Pateikti tik dalijimosi ir mokymosi tikslais ir nėra jokie medicininių patarimų tikslai. Jei yra kokių nors pažeidimų, prašome liestisAutorius dėlIštrintijonas. Šiame straipsnyje išreikštos nuomonės neatspindi BONTAC.