Mokslinis NMN kiekybinio nustatymo biologiniuose mėginiuose metodas
1. Įvadas
Papildymasnikotinamido mononukleotidas (NMN)nikotinamido adenino dinukleotido (NAD+) lygio reguliavimui buvo pristatyta kaip perspektyvi senėjimą stabdanti intervencija. Tačiau vis dar yra rimtas iššūkis tiksliai kiekybiškai įvertinti NAD+ tarpines medžiagas,NMNvisų pirma. Šiuo tyrimu siekiama įdiegti naują metodą, dvigubų izotopų tarpininkaujamą LC-MS/MS metodiką (dimeLC-MS/MS), skirtą tiksliai kiekybiškai įvertintiNMNbiologiniuose mėginiuose.
2. Veiksniai, turintys įtakos tiksliam NMN nustatymui
NMN sunku tiksliai aptikti dėl jo pažeidžiamumo fermentų skaidymui, konversijai apdorojant mėginius, sudėtingą elgesį skirtingose kolonėlės ir ekstrahavimo sąlygose, taip pat matricos efektą.
Tiksliau, NMN pasižymi dideliu poliškumu ir mažu lakumu, kurį lengva ištirpinti vandenyje, bet sunku ištirpinti organiniuose tirpikliuose. Šios savybės labai riboja daugelio įprastų kiekybinės analizės metodų taikymą.
BIologiniai mėginiaipavyzdžiuikraujyje yra reikšmingas CD38 ir CD73 (ekto-5’-nukleotidazė), kurios abi galėtų naudoti NMN kaip substratą.
NMN elgesys kolonoje yra labai sudėtingas, tikriausiai dėl dvišalio jo krūvių pobūdžio, todėl subtilūs ekstrahavimo ir kolonėlės sąlygų skirtumai daro didelę įtaką patikimam ir tiksliam NMN aptikimui.
3. Įveikimo strategijosdimeLC-MS/MSsumažinti poveikio veiksnių poveikį
Siekiant išvengti minėtų veiksnių trukdžių, naudojama NMN-2 kolonėlės prototipas. Šioje kolonėlėje yra C18 pagrindu pagamintų didelio grynumo silicio dioksido dalelių, kurios geriau suriša hidrofilinius junginius nei anglies dalelės, pagerindamos atskyrimo galimybes.
Perchloro rūgštis (PCA) naudojama, nes ji gali efektyviai išgauti NAD+ ir NMN iš biologinių mėginių, tokių kaip plazma, su minimaliais nuostoliais.
Siekiant pakoreguoti matricos efektus, prieš ekstrahuojant PCA į biologinius mėginius pridedamas fiksuotas kiekvieno izotopinio junginio kiekis (1 μM).
4. PrivalumassdimeLC-MS/MS
Dvigubi izotopiniai NMN standartai, NMN (M + 14) ir NMN (M + 5), pagal LC-MS/MS pagrįstą metodiką gali tiksliai atsekti NMN likimą apdorojant mėginius, o tai žymiai padidina NMN matavimo biologiniuose mėginiuose tikslumą ir patikimumą. Be to, dimeLC-MS/MS gali įvertinti ekstrahavimo efektyvumą ir absoliučią NMN koncentraciją įvairių tipų biologiniuose mėginiuose.
5. Išvada
ThYranaujas LC-MS/MS-pagrįsta metodika su dvigubais izotopiniais NMN standartais gali tiksliai ir patikimai išmatuoti NMN biologiniuose mėginiuose.Jis gali būti naudojamas būsimiems NMN vartojimo tyrimams.
6. Nuoroda
Unno, Junya ir kt. "Absoliutus nikotinamido mononukleotido kiekybinis nustatymas biologiniuose mėginiuose dvigubo izotopų tarpininkaujama skysčių chromatografija-tandeminė masių spektrometrija (dimeLC-MS/MS)." npj senėjimas t. 10,1 2. 2024 m. sausio 2 d., doi:10.1038/s41514-023-00133-1
Kodėl verta rinktisBONTAC?
BONTACyra pasaulinėsNMNindustrija. Mes turime pirmąją viso fermento katalizės technologiją Kinijoje ir tapome pirmaujančia kofermentų produktų, plačiai naudojamų sveikatos pramonėje, medicinoje ir grožiu, žaliajame žemės ūkyje, biomedicinoje ir kitose srityse, įmone. Visų pirma, BONTAC yra NMNHarvardo universiteto garsiosios Davido Sinclairo komandos žaliavų tiekėjas. Mūsų paslaugos ir produktai yra patikimi. Be toBONTACturi nepriklausomą kofermentų inžinerijos technologijų tyrimų centrą provincijos lygmeniu Kinijoje ir savarankiškas gamyklas, kuriose galima užtikrinti produktų grynumą ir stabilumą.
Atsakomybės apribojimas
ThYrastraipsnis yraremiantis nuoroda įakademinis žurnalas. Atitinkama informacija yraPateiktitik dalijimosi ir mokymosi tikslais ir nereiškia jokių medicininių patarimų. Jei yra kokių nors pažeidimų, prašomeliestisAutoriusdėlIštrintijonas. Šiame straipsnyje išreikštos nuomonės neatspindiBONTAC.