Nepaprasti itin jautraus ELISA su tio-NAD ciklu privalumai nustatant Dengės NS1 baltymą

1. Įvadas

Dengės karštligė yra ūminė infekcinė liga, kurią sukeliaDengės virusasįkandus užkrėstam Aedes rūšies (Ae. aegypti arba Ae. albopictus) uodui,su pagrindiniais simptomais, tokiais kaip aukštas karščiavimas, galvos svaigimas, galvos skausmas, bėrimas irStiprusskausmai (akių, raumenų, sąnarių ar kaulų skausmas) ir kt. Ši liga yra plačiai paplitusi atogrąžų ir subtropikų klimate. Apskaičiuota, kad kasmet užsikrečia nuo 100 iki 400 milijonų žmonių, iš kurių daugiau nei 80 proc. paprastai yra lengvi ir besimptomiai. Nepaisant to, sunki Dengės karštligė gali padidinti mirties riziką, jei nebus tinkamai gydoma. Taigi ankstyva šios ligos diagnozė yra svarbi savalaikiam jos gydymui.

Pažymėtina, kad nestruktūrinis baltymas 1 (NS1), labai konservuotas glikoproteinas, daugiausia išsiskiria užsikrėtusDelspinigiusvirusas, kuris intensyviai laikomas pagrindiniu patogenezės veiksniu,Dengės karštligė. Taigi NSI paprastai naudojamas kaip biožymeklis ankstyvam šios ligos nustatymui.

Šiame tyrime buvo atliktas su sumuštinių fermentais susietas imunosorbento tyrimas(ELISA)kartu sutio nikotinamido adenino dinukleotidas (tio-NAD/S-NAD)ciklo metodas (toliau – itin jautrus ELISA) naudojamas NSI aptikti, o po to palyginamas su NAAT, kad būtų patvirtintas jo aptikimo tikslumas.

2. Tradicinių aptikimo metodų privalumai ir trūkumaiDengės karštligė 

Šiuo metu tŠtai keturi pagrindiniai aptikimo metodaidėl Dengės karštligė.


Viruso išskyrimas ir identifikavimas yra labai specifiški, tačiau užima daug laiko ir užtrunka mažiausiai 5 dienas. Greitasis antigeno testas yra greičiausias ir ekonomiškiausias tarp kitų metodų, tačiau jautrumas ir specifiškumas yra palyginti maži. Serologinis tyrimas, pagrįstas IgM ir IgG, yra ribojamas pagal infekcijos dienų skaičių, nesProgramatyrimas turi būti atidėtas, kol antikūnų lygis pakils iki aptinkamo lygio.

Klinikoje NAAT dažnai taikomas nustatantDengės karštligėdėl didelio jautrumo ir specifiškumo nešvarumų. Tačiau šis metodas yra brangus, sunkus ir linkęs į klaidingą pozityvumą, kurį turi atlikti apmokytas personalas.Siekiant įveikti šių metodų trūkumus, naujas aptikimo metodasitin jautrus ELISA yra taikomas šiame tyrime.

3. Itin jautraus ELISA darbo eiga su tio-NAD ciklu

Antikūnų poraYranaudojamas NS1 baltymui sumuštinyje ELISA surinkti, ir šarminė fosfatazėYrapaženklintas ant antrinio antikūno. Be antikūnų, androsterono darinys, 3α-hidroksisteroido dehidrogenazė, tio-NAD ir NADHesinaudojamas tio-NAD fermentų ciklo sistemai sukurti. Tio-NAD ciklinės reakcijos metu tio-NADH nuolat kaupėsi trikampiu skaičiumi ir galėjo būti tiesiogiai matuojamas esant 405 nm absorbcijai.

4. Itin jautraus ELISA ir NAAT palyginimas nustatant Dengės NS1 baltymą

NAAT 60 egzempliorių yra teigiami dengės karštligė, o 25 - neigiami. Šių Dengės karštligės teigiamų mėginių NAAT ciklo slenksčio (KT) vertė svyravo nuo 12,42 iki 31,41.Itin jautraus ELISA tyrimo metu 59 mėginiai yra atitinkamai teigiami NAAT rezultatams, o 25 mėginiai yra visiškai neigiami NAAT rezultatams.

Palyginti su NAAT, itin jautraus ELISA jautrumas ir specifiškumas yra atitinkamai 98,3% ir 100% (2 lentelė). Iš 60 NAAT patvirtintų dengės karštligės teigiamų pacientų mėginių, tik 1 mėginys yra neigiamas itin jautraus ELISA tyrime. NAAT duomenys parodė, kad mėginys yra 4 tipo DENV infekcijos atvejis, kurio KT vertė yra 21,59. Itin jautraus ELISA rezultatai beveik tobulai sutampa su NAAT rezultatais, kurių kappa vertė yra 0,972 (95% PI: 0,917-1.0).

5. Išvada

Itin jautrus ELISA metodas yra lengvai atliekamas ir nereikalauja profesionalių stažuotojų. Aptikimą galima pradėti iškart gavus nedidelį mėginį. Jis ypač tinka ankstyvam Dengės ligos nustatymui mažas pajamas gaunančiose šalyse.

Nuoroda

Chen, Po-Kai ir kt. "Pažangus Dengės NS1 baltymo aptikimo metodas, naudojant itin jautrų ELISA su Thio-NAD ciklu". Virusai, t. 15,9, 1894. 2023 m. rugsėjo 8 d., doi:10.3390/v15091894

Produkto privalumai ir savybėsBONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC yra one iš nedaugelio įmoniųKinijakuris gali gaminti Thio-NADsu"Bonzyme"Viso fermento metodas(Ekologiškas;nėra kenksmingų tirpiklių likučių) ir unikali "Bonpure" septynių pakopų valymo technologija. BONTAC integruoja mokslinius tyrimus ir plėtrą, gamybą ir pardavimą, savarankiškos gamyklos ir daugybė tarptautinių sertifikatų, užtikrinančių aukštą produktų kokybę ir stabilų tiekimą.

Atsakomybės apribojimas

BONTAC neprisiima jokios atsakomybės už jokias pretenzijas, tiesiogiai ar netiesiogiai kylančias dėl jūsų pasitikėjimo šioje svetainėje esančia informacija ir medžiaga.