Kiekybinis įvertinimas NAD+ ir jo metabolitai pelių sėdimuosiuose nervuose

Įvadas

Plačiai pripažintos esminės nikotinamido adenino dinukleotido (NAD+) ir jo metabolitų dalys senėjimui ir neurodegeneracijai. Siekiant paskatinti biocheminių tyrimų ir intervencijų, skirtų senėjimui ir neurodegeneracinėms ligoms, pažangą, labai svarbu tiksliai kiekybiškai įvertinti NAD+ ir jo metabolitų kiekį NAD+ gelbėjimo kelyje. Čia taikomas patikimas ir tikslus LC-MS/MS metodas, skirtas kiekybiškai įvertinti NAD+ ir jo metabolitų kiekį normaliame ir sužeistame pelių sėdimajame nerve.

Esamų NAD+ ir jo metabolitų kiekybinio nustatymo metodų apribojimai

Tradiciniai NAD+ ir jo metabolitų kiekybinio nustatymo metodai, tokie kaip HPLC-UV, NMR, kapiliarinės zonos elektroforezė arba kolorimetriniai fermentiniai tyrimai, susiduria su įvairiais jautrumo, selektyvumo ir netiesioginio matavimo iššūkiais. Kalbant apie esamus LC-MS/MS tyrimus, skirtus ląstelių ar audinių NAD+ ir jo metabolitų matavimams, vis dar reikia įveikti daug sunkumų, tokių kaip ilgesnis veikimo laikas, prastas chromatografinis sulaikymas ir nepatenkinamos smailių formos. Be to, šie metodai gali apimti tik vieną ar tris NAD+ gelbėjimo kelyje esančias medžiagas.

LC-MS/MS metodo modifikacijos

Remiantis esamais LC-MS/MS tyrimais, atliekami chromatografijos sąlygų, pakaitinės matricos ir MS/MS sąlygų pakeitimai. Tiksliau, 5 μM metileno fosfono rūgšties naudojama kaip judriosios fazės priedas, kuris aiškiai skatina signalo intensyvumą ir smailės formą. Atsižvelgiant į santykinai švarų ir paprastą niekada mėginių pobūdį ir mažą jų dydį, itin grynas vanduo bandomas kaip pakaitinė matrica. Vietoj hidrofilinės sąveikos skysčių chromatografijos kolonėlės ir hiperkarbo kolonėlės naudojama Waters Atlantis Premier BEH C18 AX kolonėlė, kurios unikali MaxPeak HPS didelio našumo paviršiaus technologija (kolonėlės vidinės sienelės pasyvavimas, metalo paviršiaus pašalinimas) užtikrina aukštą visų analičių atkuriamumą, smailės simetriją ir bazinės linijos atskyrimą.Be to, MS sąlygos yra optimizuotos taip, kad būtų sumažintas NAD+ trukdžių signalas ciklinės adenozino difosfato ribozės (cADPR) kanale, išlaikant cADPR ir nikotinamido mononukleotido (NMN) atsaką, esant 4000 V jonų purškimo įtampai, 450 ° C turbo šildytuvo temperatūrai, 50 psi 1 dujoms, 50 psi 2 dujoms, 30 psi užuolaidų dujoms ir 12 psi susidūrimo dujoms.

Reprezentatyvi nervų mėginių chromatograma (normalus ir sužeistas)

Visos penkios analitės pasiekia pradinį atskyrimą, kai cADPR yra jautrus biožymeklis neurodegeneracijos modelyje. Šiuo atveju sėdimojo nervo aksotomija sukelia aksonų degeneraciją, dėl kurios sumažėja NAD+ lygis ir padidėja NMN lygis sužeistuose nervuose, todėl NMN/NAD+ santykis padidėja maždaug 2 kartus. Tuo pačiu metu nikotinamido (NAM) ir adenozino difosfato ribozės (ADPR) kiekis sumažėja maždaug 2 kartus, o cADPR lygis padidėja daugiau nei 8 kartus. Šie rezultatai atitinka anksčiau praneštų tyrimų rezultatus, patvirtinančius šio modifikuoto LS-MS/MS metodo tikslumą kiekybiškai įvertinant NAD+ ir jo metabolitus.

Išvada

Šis modifikuotas LC-MS/MS metodas leidžia efektyviai atskirti NAD+, NMN, NAM, ADPR ir cADPR per trumpą 5 minučių laiką, o tai prisideda prie ankstyvos įvairių neurologinių sutrikimų diagnozės ir vaistų senėjimo ir neurodegeneracinių ligų kūrimo.

Nuoroda

Ma Y, Deng L, Du Z. LC-MS/MS metodo, skirto kiekybiškai įvertinti NAD+ ir susijusių metabolitų pelių sėdimuosiuose nervuose, sukūrimas ir patvirtinimas ir jo taikymas nervų pažeidimo gyvūnų modeliui. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTACNuo 2012 m. užsiima kofermentų ir natūralių produktų žaliavų moksliniais tyrimais ir plėtra, gamyba ir pardavimu, turi savarankiškas gamyklas, daugiau nei 170 pasaulinių patentų ir stiprią tyrimų ir plėtros komandą. BONTAC turi didelę mokslinių tyrimų ir plėtros patirtį bei pažangias technologijasNAD ir jo pirmtakai(pvz. NMN ir NR). Galima pasirinkti įvairius NAD tipus, įskaitant NAD ER klasę (endoksinų pašalinimas), NAD I klasę (IVD / maisto papildas / kosmetikos žaliaviniai milteliai), NAD II klasę (API / tarpiniai produktai) ir NAD IV klasę (jei yra didesnis tirpumo reikalavimas), kurie gali būti pateikiami liofilizuotų miltelių arba kristalinių miltelių pavidalu. BONTAC NAD grynumas gali siekti daugiau nei 98%.

Atsakomybės apribojimas

Šis straipsnis yra pagrįstas nuoroda akademiniame žurnale. Atitinkama informacija pateikiama tik dalijimosi ir mokymosi tikslais ir nėra jokie medicininiai patarimai. Jei yra kokių nors pažeidimų, prašome kreiptis į autorių dėl ištrynimo. Šiame straipsnyje išreikštos nuomonės neatspindi BONTAC pozicijos. BONTAC jokiomis aplinkybėmis nebus laikoma atsakinga už bet kokias pretenzijas, žalą, nuostolius, išlaidas ar išlaidas, tiesiogiai ar netiesiogiai atsiradusias dėl jūsų pasitikėjimo šioje svetainėje esančia informacija ir medžiaga.