Kiekybinis NAD+ ir jo metabolitų nustatymas pelių sėdimuosiuose nervuose

Įvadas

Svarbiausios nikotinamidadenindinukleotido (NAD+) ir jo metabolitų dalys senstant ir neurodegeneruojant buvo plačiai pripažintos. Siekiant paskatinti pažangą siekiant biocheminių tyrimų ir intervencijų, nukreiptų į senėjimą ir neurodegeneracines ligas, labai svarbu tiksliai kiekybiškai įvertinti NAD+ ir jo metabolitų kiekį NAD+ gelbėjimo kelyje. Čia taikomas patikimas ir tikslus LC-MS/MS metodas, skirtas kiekybiškai įvertinti NAD+ ir jo metabolitų kiekį normaliame ir sužeistame pelės sėdimajame nerve.

Esamų NAD+ ir jo metabolitų kiekybinio įvertinimo metodų apribojimai

Tradiciniai NAD+ ir jo metabolitų kiekybinio nustatymo metodai, tokie kaip HPLC-UV, NMR, kapiliarinės zonos elektroforezė arba kolorimetriniai fermentiniai tyrimai, susiduria su įvairiais jautrumo, selektyvumo ir netiesioginio matavimo iššūkiais. Kalbant apie esamus LC-MS/MS tyrimus ląstelių ar audinių NAD+ ir jo metabolitų matavimams, vis dar yra daug sunkumų, kuriuos reikia įveikti, pavyzdžiui, ilgesnis veikimo laikas, prastas chromatografijos sulaikymo elgesys ir nepatenkinamos smailių formos. Be to, šie metodai gali apimti tik vieną ar tris medžiagas, esančias NAD+ gelbėjimo kelyje.

SC-MS/MS metodo modifikacijos

Remiantis esamais SC-MS/MS bandymais, atliekami chromatografijos sąlygų, pakaitinės matricos ir MS/MS sąlygų pakeitimai. Konkrečiai, 5 μM metileno fosfono rūgšties naudojamas kaip judančiosios fazės priedas, kuris aiškiai skatina signalo intensyvumą ir smailės formą. Atsižvelgiant į tai, kad niekada mėginiai yra palyginti švarūs ir paprasti, ir jų mažas dydis, ultrapure vanduo yra išbandytas kaip pakaitinė matrica. Vietoj hidrofilinės sąveikos skysčių chromatografijos kolonėlės ir hiperkarbo kolonėlės naudojama "Waters Atlantis Premier BEH C18 AX" kolonėlė, kurios unikali "MaxPeak HPS" didelio našumo paviršiaus technologija (kolonėlės vidinės sienelės pasyvinimas, metalinio paviršiaus pašalinimas) užtikrina aukštą visų analičių atkuriamumą, smailių simetriją ir bazinės linijos atskyrimą.Be to, MS sąlygos yra optimizuotos taip, kad sumažintų NAD+ trukdžių signalą cikliniame adenozino difosfato ribozės (cADPR) kanale, išlaikant cADPR ir nikotinamido mononukleotido (NMN) atsaką, esant 4000V jonų purškimo įtampai, 450 °C turbo šildytuvo temperatūrai, 50 psi dujoms 1, 50 psi dujoms 2, 30 psi užuolaidinėms dujoms ir 12 psi susidūrimo dujoms.

Nervų mėginių reprezentatyvi chromatograma (normalus ir sužeistas)

Visos penkios analitės pasiekia pradinį atskyrimą, kai cADPR yra jautrus biomarkeris neurodegeneracijos modelyje. Čia sėdimojo nervo aksotomija sukelia aksonų degeneraciją, dėl kurios sumažėja NAD+ lygis ir padidėja NMN lygis sužeistuose nervuose, todėl NMN/NAD+ santykis padidėja maždaug 2 kartus. Tuo pačiu metu nikotinamido (NAM) ir adenozindifosfato ribozės (ADPR) kiekis sumažėja maždaug 2 kartus, o cADPR lygis padidėja daugiau nei 8 kartus. Šie rezultatai atitinka anksčiau pateiktų tyrimų rezultatus, patvirtinančius šio modifikuoto LS-MS/MS metodo tikslumą kiekybiškai įvertinant NAD+ ir jo metabolitus.

Išvada

Šis modifikuotas LC-MS/MS metodas leidžia efektyviai atskirti NAD+, NMN, NAM, ADPR ir cADPR per trumpą 5 min. veikimo laiką, o tai prisideda prie ankstyvos įvairių neurologinių sutrikimų diagnostikos ir vaistų nuo senėjimo ir neurodegeneracinių ligų kūrimo.

Nuoroda

Ma Y, Deng L, Du Z. LC-MS/MS metodo, skirto NAD+ ir susijusiems metabolitams pelių sėdimuosiuose nervuose kiekybiškai nustatyti, kūrimas ir įteisinimas bei jo taikymas nervų sužalojimo gyvūnų modeliui. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTAC nuo 2012 m. yra skirta moksliniams tyrimams ir plėtrai, koenzimo ir natūralių produktų žaliavų gamybai ir pardavimui, turėdama savarankiškas gamyklas, daugiau nei 170 pasaulinių patentų ir stiprią mokslinių tyrimų ir plėtros komandą. BONTAC turi didelę mokslinių tyrimų ir plėtros patirtį bei pažangias technologijas biosintezės srityje NAD ir jo pirmtakai (pvz. NMN ir NR). Reikia pasirinkti įvairius NAD tipus, įskaitant NAD ER klasę (endoksino pašalinimas), NAD I klasę (IVD / maisto papildas / kosmetikos žaliaviniai milteliai), NAD II klasę (API / tarpiniai produktai) ir NAD IV klasę (jei yra aukštesnis tirpumo reikalavimas), kurie gali būti pateikiami liofilizuotų miltelių arba kristalinių miltelių pavidalu. BONTAC NAD grynumas gali viršyti 98%.

Atsakomybės apribojimas

Šis straipsnis pagrįstas nuoroda akademiniame žurnale. Atitinkama informacija pateikiama tik dalijimosi ir mokymosi tikslais ir nėra susijusi su jokiais medicininių patarimų tikslais. Jei yra kokių nors pažeidimų, susisiekite su autoriumi, kad jis būtų ištrintas. Šiame straipsnyje išreikštos nuomonės neatspindi BONTAC pozicijos. BONTAC jokiomis aplinkybėmis nebus laikoma atsakinga už jokias pretenzijas, žalą, nuostolius, išlaidas ar sąnaudas, tiesiogiai ar netiesiogiai atsirandančias dėl jūsų pasitikėjimo šioje svetainėje pateikta informacija ir medžiaga.