Itin jautraus ELISA su Thio-NAD ciklu privalumai nustatant Dengės NS1 baltymą
1. Įvadas
Dengės karštligė yra ūmi infekcinė liga, kurią sukeliaDengės virusas per užsikrėtusio Aedes genties (Ae. aegypti arba Ae. albopictus) uodo įkandimą,pagrindiniai simptomai – aukšta temperatūra, galvos svaigimas, galvos skausmas, bėrimas irsunkus skausmas (akių, raumenų, sąnarių ar kaulų skausmas) ir kt. Ši liga plačiai paplitusi atogrąžų ir subtropikų klimato zonose. Manoma, kad kasmet užsikrečia nuo 100 iki 400 milijonų žmonių, iš kurių daugiau nei 80 % atvejų liga būna lengva ir besimptomė. Vis dėlto sunki Dengės karštligė gali padidinti mirties riziką, jei ji netinkamai gydoma. Todėl ankstyva šios ligos diagnostika yra svarbi laiku pradėtam gydymui.Pažymėtina, kad nestruktūrinis baltymas 1 (NS1), labai konservatyvus glikoproteinas, daugiausia išskiriamas infekcijos metuDengėsviruso, kuris intensyviai laikomas pagrindiniuDengės karštligėspatogenezės veiksniu. Todėl NS1 paprastai naudojamas kaip biomarkeris ankstyvam šios ligos nustatymui.
Šiame tyrime naudojamas sendvičinis fermentų imunologinis tyrimas (ELISA) kartu sutio nikotinamido adenino dinukleotido (tio-NAD/S-NAD)ciklo metodu (toliau vadinamas itin jautriu ELISA) NS1 aptikimui, o vėliau lyginamas su NAAT, siekiant patvirtinti jo aptikimo tikslumą.
2. Tradicinių Dengės karštligės nustatymo metodų privalumai ir trūkumaiDengės karštligės
Šiuo metuyra keturi pagrindiniai nustatymo metodaifor Dengės karštligė.
Viruso išskyrimas ir identifikavimas pasižymi dideliu specifiškumu, tačiau yra daug laiko reikalaujantis, užtrunka mažiausiai 5 dienas. Greitasis antigeno testas yra greičiausias ir ekonomiškiausias iš kitų metodų, tačiau jautrumas ir specifiškumas yra palyginti maži. Serologinis tyrimas, pagrįstas IgM ir IgG, yra ribojamas infekcijos dienų skaičiaus, nes testas turi būti atidėtas, kol antikūnų lygis pakyla iki aptinkamo lygio.
Klinikoje NAAT dažnai taikomasDengės karštligės dėl didelio jautrumo ir specifiškumo. Tačiau šis metodas yra brangus, daug darbo reikalaujantis ir linkęs duoti klaidingai teigiamus rezultatus, todėl jį turi atlikti apmokytas personalas.Siekiant įveikti šių metodų trūkumus, šiame tyrime taikomas naujas nustatymo metodas –itin jautrus ELISA. taikytas šiame tyrime.
3. Itin jautraus ELISA su tio-NAD ciklu darbo eiga
Antikūnų porais naudojama NS1 baltymui surinkti sendvičiniame ELISA, o šarminė fosfatazėis pažymėta antriniame antikūne. Be antikūnų, androsterono darinys, 3α-hidroksisteroidų dehidrogenazė, tio-NAD ir NADHyra naudojami tio-NAD fermentų ciklo sistemai sukurti. Tio-NAD ciklo reakcijos metu tio-NADH nuolat kaupiasi trikampio skaičiaus būdu ir gali būti tiesiogiai matuojamas esant 405 nm absorbcijai..
4. Itin jautraus ELISA ir NAAT palyginimas nustatant Dengės NS1 baltymą
NAAT metu 60 mėginių yra teigiami dėl Dengės, o 25 – neigiami. NAAT ciklo slenksčio (CT) vertė tų teigiamų mėginių svyravo nuo 12,42 iki 31,41.Itin jautriame ELISA 59 mėginiai atitinkamai teigiami NAAT rezultatams, o 25 mėginiai visiškai atitinkamai neigiami NAAT rezultatams.Palyginti su NAAT, itin jautraus ELISA jautrumas ir specifiškumas yra atitinkamai 98,3 % ir 100 % (2 lentelė). Iš 60 NAAT patvirtintų teigiamų Dengės pacientų mėginių tik 1 mėginys yra neigiamas itin jautriame ELISA. NAAT duomenys parodė, kad mėginys yra 4 tipo DENV infekcijos atvejis, kurio CT vertė 21,59. Itin jautraus ELISA rezultatai beveik visiškai sutampa su NAAT rezultatais, kappa vertė 0,972 (95 % PI: 0,917-1.0).
5. Išvada
Itin jautrus ELISA metodas yra lengvai atliekamas ir nereikalauja profesionalų apmokytų operatorių. TTyrimą galima pradėti iš karto gavus nedidelį mėginį.DengėsJis ypač tinka ankstyvamligos nustatymui.Nuorodos
Chen, Po-Kai ir kt. „Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.“ Viruses t. 15, nr. 9 1894. 2023 m. rugsėjo 8 d., doi:10.3390/v15091894Produkto privalumai ir savybėsBONTAC tio-NAD/S-NAD
BONTAC yra viena iš nedaugelio įmoniųviena iš nedaugelio įmoniųKinija kurios gali gaminti tio-NAD, turėdamas„Bonzyme“ visiškai fermentinis metodas (aplinkai draugiškos; be kenksmingų tirpiklių likučių) ir unikali „Bonpure“ septynių žingsnių gryninimo technologija. BONTAC integruoja mokslinius tyrimus, plėtrą, gamybą ir pardavimą, turi nuosavas gamyklas ir daugybę tarptautinių sertifikatų, užtikrinančių aukštą produktų kokybę ir stabilų tiekimą.
